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分子實(shí)驗(yàn)室如何選擇核酸提取儀？
發(fā)布日期：2022/11/3 9:13:40

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，以核酸雜交、核酸擴(kuò)增及核酸序列分析等為代表的分子診斷和檢測(cè)技術(shù)的重要作用日益凸顯。樣品前處理所花費(fèi)的時(shí)間占整個(gè)分析過(guò)程的60%，而檢測(cè)誤差的90%出現(xiàn)在前處理領(lǐng)域。核酸提取作為分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步”，也是最關(guān)鍵的一步，其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響到下游分子生物學(xué)試驗(yàn)的成敗。

國(guó)內(nèi)的二級(jí)醫(yī)院、三級(jí)醫(yī)院、疾控中心、第三方檢測(cè)等符合國(guó)家新冠檢測(cè)要求的機(jī)構(gòu)，依然會(huì)不斷的接收到大量的新冠檢測(cè)需求。同時(shí)，已經(jīng)有很多省份出臺(tái)政策文件，進(jìn)行了全省范圍內(nèi)的醫(yī)院擴(kuò)建，特別是二級(jí)醫(yī)院。面對(duì)市場(chǎng)上五花八門的產(chǎn)品，如何選擇一款合適的核酸自動(dòng)提取儀，就得細(xì)細(xì)分析。

1.核酸提取原理

1.1

采用離心柱法的儀器

離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)和自動(dòng)移液裝置相結(jié)合的方法，通量一般在1-12個(gè)樣本，操作時(shí)間和手工提取差不多，并不能提高實(shí)際工作效率，且價(jià)格昂貴，不同型號(hào)儀器的耗材也不能通用，僅適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。

1.2

采用磁珠法的儀器

以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高PH值下與核酸分離的原理，再通過(guò)移動(dòng)磁珠或轉(zhuǎn)移液體來(lái)實(shí)現(xiàn)核酸的整個(gè)提取純化過(guò)程。由于其原理的獨(dú)特性，所以可設(shè)計(jì)成很多種通量，既可以單管提取，也可以提取8-96個(gè)樣本，且其操作簡(jiǎn)單快捷，一批次上機(jī)提取時(shí)間為9~40min（不同樣本不同廠家時(shí)間不同），大大提高了實(shí)驗(yàn)效率，且成本低廉，因而可以在不同實(shí)驗(yàn)室使用，是目前市場(chǎng)上的主流儀器。

磁珠法自動(dòng)核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法

1.2.1

抽吸法

顧名思義，抽吸法就是通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)進(jìn)行。磁鐵分為2種裝置，磁鐵在底部和側(cè)面。抽吸法最大的問(wèn)題在于，為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠，移液器不能靠磁珠太近，以防磁珠連同廢液被抽掉。1）磁鐵在底部的裝置，因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部，這樣漂洗液就不能完全去除，殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后面的洗脫效率和PCR成功率；2）磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會(huì)少些，但是洗脫的效率也不好，依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中，除非等上半小時(shí)以上，所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站，提取一輪的時(shí)間需要150分鐘，32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。

1.2.2

磁棒法核酸提取儀

通量通常有8、16、32、96通道，磁棒只帶走磁珠，轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中，另外選擇磁棒法的提取儀器最好要功能更齊全的，比如可以加熱，每個(gè)加熱槽最好獨(dú)立溫控，這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度，另外很重要的一點(diǎn)是，帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌，這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗徹底。

磁棒法核酸提取儀混勻方式

1)    震蕩混勻：通過(guò)磁棒的上下震動(dòng)混勻磁珠和核酸，為市面上主流方法

2)    旋轉(zhuǎn)混勻：通過(guò)磁棒的旋轉(zhuǎn)混勻磁珠和核酸，相比傳統(tǒng)的振蕩式混勻技術(shù)，氣溶膠的產(chǎn)生量大幅降低50%以上。交叉污染而導(dǎo)致的假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)被更有效控制，進(jìn)一步保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，旋轉(zhuǎn)的混勻方式最大限度的保留了DNA的長(zhǎng)鏈，減少核酸機(jī)械的斷裂，提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。

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